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金边凤尾兰的脱毒及组培快繁

来源：作者：发布时间：2013-07-27 11:36

金边凤尾兰为百合科丝兰属凤尾兰的一个园艺品种,是观赏价值极高的常绿灌木。常年浓绿,数株成丛,高低不一。开花时花茎高耸挺立,繁多的白花下垂,姿态优美,可布置在花坛中心、池畔、台坡和建筑物附近,原产北美东南部,我国各地均有栽培。由于其叶片金边和巨大的花序十分引人注目,且生长势强健,栽培要求不高,很受人们欢迎,是优良的常绿、彩叶绿化树种。目前金边凤尾兰生产上存在的主要问题是病毒造成的品种退化,使产量降低、植株矮化,大大降低了商品价值。金边凤尾兰常见的繁殖方式有扦插或分株繁殖等,繁殖系数低,费时长,且金边性状易消失,影响观赏质量。采用组织培养能有效保留金边性状,达到快速繁殖的目的。因此,用脱毒与组培快繁技术提高产量、改善品质就成为金边凤尾兰栽培取得高经济效益的关键。
    1茎尖培养脱毒
    侵染金边凤尾兰的病毒主要有金边凤尾兰褪绿斑驳病毒、皱叶病毒等。一般带毒植株在35~38℃条件下种植2个月,经高温热处理,就能使病毒失去活性。为了彻底消除病毒,可将植株栽培在热处理条件下,处理一段时间后,再采取其茎尖进行离体培养,这样脱毒效果更好。
    1.1材料选择及消毒
    金边凤尾兰外植体材料要选择品种优良、生长健壮、无病虫害的植株。截取带叶茎干,逐层剥去叶片,然后切留2cm带顶茎段,用洗涤液或洗衣粉液充分洗涤,再用清水反复冲洗,置于超净台上放入0.1%的升汞溶液内消毒8~10min,取出后用无菌水冲洗3~5次。消毒及冲洗过程中要不断摇动,使药剂充分接触,消毒彻底。

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    1.2剥取茎尖
    带顶茎段消毒后,放在无菌纸上吸干水分,在超净台无菌条件下,用镊子及解剖刀剥去嫩叶,露出生长锥。移入25~50倍解剖镜下,用刀尖切下0.3~0.5mm的生长点,并带1~2个叶原基,迅速接种到培养基上,防止茎尖脱水。接种时应使茎尖向上,不能倒置。茎尖剥离的大小是脱毒效果的关键技术。茎尖剥离越小,脱除病毒的效果越好,但接种不易成活;茎尖剥离得越大,接种成活率越高,但脱除病毒的效果差。
    1.3结合热处理脱毒茎尖培养
    将带毒植株进行盆栽,放入人工控制箱内经38~40℃高温处理6~8周,采切0.5mm大小的茎尖培养,脱除褪绿斑驳病毒、皱叶病毒等。结合经高温热处理和茎尖培养脱除病毒,操作简便,容易掌握,脱毒效果好,茎尖培养成活率高。
    1.4无毒茎尖的培养
    将剥取的茎尖在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%,pH值5.8的培养基上培养,培养温度控制在25±1℃,光照强度为1 000~2 000Lx,每天光照10~12h,室内相对湿度控制在60%~70%。光照过强时,叶片容易失水而黄化。培养试管内空气湿度大,有利金边凤尾兰生长。一般培养4d后开始出现愈伤组织,6d后在切口处长出淡黄不透明的愈伤组织块,经1周左右的培养,即可观察到茎尖形成约2~3mm的小芽点,随后芽点转绿膨大,2周时可见到萌发出多个绿芽;25d后,绿芽逐渐抽茎长叶;培养1个月左右时,株高可达2cm。

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    1.5无病毒苗的鉴定
    当茎尖培养达到一定数量后,取出部分作严格的病毒检测。用抗血清法、电子显微镜检测法、ELISA法或指示植物法进行病毒的鉴定,以确保脱毒后的试管苗不含病毒。
    2 快速繁殖
    2.1 继代增殖
    经鉴定合格后,可继代扩大增殖。金边凤尾兰的继代增殖以茎段增殖或丛生芽增殖,这种方式繁殖速度快、增殖倍数高、种性变异小、成苗率高。继代培养与茎尖分化采用相同的培养基MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%,pH值5.8,培养温度25±1℃,光照强度2 000~3 000Lx,每天光照14~16h,能分化大量不定芽,形成无根苗。当培养基颜色逐渐变暗灰色,不定芽发生转移后,应转移到新的培养基上。25d后,每个芽周围又可长出2~3个不定芽,60d长成2~3cm的丛状芽,此时即可切下来再进行继代培养。以后每25d可继代增殖1次,反复进行继代增殖,就能在较短时间内繁殖出大量嫩芽。
    2.2 生根培养
    金边凤尾兰需经生根培养后,才能移栽。当增殖培养过程中所产生的不定芽长至2~3cm高以上时,可将其在无菌条件下从基部切割下来,然后转接到生根培养基上以诱导生根。生根培养基成分为1/2MS+NAA 0.2mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%+活性炭0.3%。1周后,嫩茎基部形成愈伤组织,培养2~3周生根。中国苗木网,www.999miaomu.com
    2.3移栽与管理
    待组培苗在瓶内培养形成大量完整的根系时,即可炼苗移栽。将培养瓶由培养室转移到普通房间中,打开瓶盖,置室温和自然光照下炼苗3~5d,使幼苗逐渐适应外界环境条件。移栽时可先往瓶中加少量清水,并摇动培养基,然后用镊子把苗轻轻取出,洗去根部带的培养基,以防杂菌滋生,再栽植于经过干热灭菌处理的蛭石内,栽后浇足水,盘上用塑料薄膜罩严,以减少水分蒸发。5d后逐渐揭膜见光,及时通风换气,定期喷药,防止有害菌类的污染,提高试管苗的成活率。为了预防真菌或细菌引起的病害,也可将苗用高锰酸钾溶液浸泡1~2min,稍晾干后栽植。基质湿度是根系成活的关键,移栽时应注意严格控制基质的水分,既要保持基质湿润,又要防止水分过多造成烂苗。移栽初期幼苗有转黄现象,这是因为初期不适应所致,并不影响成活率。经2周的过渡,植株又恢复生长,叶片逐渐转绿。当抽出新叶时,便可移植于大田。

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