苗木培养材料的采集与消毒

　　苗木组织培养中各种用于接种培养的材料 称为外植体。包括苗木体的各种器官、组织、细 胞和原生质体等。组织培养所用的材料非常广 泛，如铁树可采取根、茎、叶、花、芽和种子的子叶，有时 也利用花粉粒和花药，其中根尖不易灭菌，一般 很少采用。
　　对于木本花卉来说，阔叶树可在一二年生的
　　枝条上采集，针叶树种多采种子内的子叶或胚
　　轴.草本苗木多采集茎尖。
　　在快速繁殖中，最常用的培养材料是茎尖， 通常切块在0. 5 001左右，如果为培养无病毒苗 而采用的培养材料通常仅取茎尖的分生组织部 分，其长度在0.111皿以下。
　　培养材料的灭菌
　　取来的材料虽经选择，外部总还有不少杂 菌，因此,接种前应进行表面灭菌。
　　①先将材料用流水冲洗干净，最后一遍用 蒸馏水冲洗，再用无菌纱布或吸水纸将材料上的 水分吸干，并用消毒刀片切成小块。
　　②在无菌环境中将材料放人70《酒精中浸 泡30?60 So
　　③再将材料移人漂白粉的饱和液或0.01% 升汞水中消莓5?10 min.
　　④取出后用无菌水冲洗三四次。
　　将已灭菡的材料，用无菌刀、剪、镊等，在无
　　菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮 胚乳等，叶片则不需剥皮。然后切成0.2? 苗木网,999miaomu.com
　　5 0巾厚的小片，这就是外植体。在操作中严 禁用手触动材料。
　　4. 4. 2 接种
　　接种是指把经过表面灭菌后的苗木材料切 碎或分离出器官、组织、细胞，转放到无菌培养 基上的全部操作过程。整个过程均须无菌 操作。
　　①接种前先把接种室紫外灯打开，照射灭 菌20?30 !^⑴或提前0. 5?1 d用髙锰酸钾和 甲醛混合液熏蒸。接种台要提前开启。
　　②操作人员进人接种室前需用肥皂水洗手 灭菌，换上经过消毒灭菌的白色工作服和拖鞋， 戴上工作帽和口罩。
　　③进人接种室后用70《的酒精棉球擦拭双 手、超净工作台和需放上工作.台的所有器具，防 止交叉污染。‘
　　④点燃酒精灯，将接种钩、剪刀、镊子放人 不锈钢盘或瓷盘内烧灼，冷却后备用。接种钩、 剪刀、镊子等不使用时浸泡在95‘冗的酒精中,用 时在火焰上灭菌，待冷却后使用。每次使用前均 需进行用具灭菌。
　　⑤将外植体放入经烧灼灭菌的不锈钢盘或 瓷盘内处理。如外植体为茎段的，将茎段上的叶 柄和茎的上下端剪掉一小节;培养脱毒苗的，在 双筒解剖镜下剥离切取大小0. 2?0.‘3 mm时茎 尖分生组织。
　　⑥烧灼瓶口和塞子，将培养瓶倾斜拿稳，打 开塞子，用镊子将接种材料送人瓶内，用接种钩 将材料压人培养基中，烧灼瓶口和塞子,并上塞。 此过程中要注意避免细菌污染。-

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