组织培养已成为当前农林种苗生产中的一种重要的繁殖手段,与常规的无性繁殖方法相比,它具有繁殖速度快、周年生产、产品一致性好等优点,尤其在繁殖一些种源稀缺的品种时,更能体现它的优势。红叶石楠是近年从国外引进的一个国际新品种,组织培养可以分以下几个步骤进行:外植体的取得→初代培养(无菌系的建立)→继代培养(增殖培养)→生根培养→炼苗及过渡移栽→移植到大田。
一、外植体的取得:
选择红叶石楠的茎尖和茎段作为组培用的外植体。在取得红叶石楠母株后,先置于温室内培养2周左右,期间注意不洒叶面水,每隔3~5天喷施一次杀菌剂,可有效降低初代培养时的污染率。在实际操作中,选取嫩枝先端未木质化和半木质化部分,剪成长10cm左右的单芽,茎段部分去叶留2mm左右叶柄,茎尖部分可保留半张小叶,以饱和洗衣粉溶液浸泡3分钟,用清水冲洗后备用。
二、初代培养:
清洗后的外植体在接种前需进行消毒处理,在超净工作台上用75%酒精浸泡10秒钟,再转入0.15%升汞溶液中灭菌8分钟,倒去灭菌液,用事先准备好的无菌水冲洗4~5次,沥干水后,即可将带腋芽的茎段或茎尖以生态学下端朝下,垂直接种到初代培养基上,以每瓶培养基接种一个外植体为宜。经过多次试验,初代培养基以1/2MS+蔗糖30g+琼脂7g+2.0BA+0.2IBA为最佳,pH值5.5~5.8,培养室温度控制在25℃~30℃之间,光照12小时。接种后一周左右腋芽开始萌动,30~40天可伸长到2cm左右,即可切下进入下一阶段的继代(增殖)培养。 999中国苗木网,www.999miaomu.com
三、继代培养(增殖培养):
一般第一次继代时增殖率较低,经2~3次继代后增殖数可达5倍左右。继代培养基可用MS+1.0BA+0.1IBA,pH值5.5~5.8之间,每日光照12小时。无根的试管苗经30~40天培养达到3cm左右时,即可切割以扩大繁殖。当继代苗达到一定数量后,可以进行生根培养。
四、生根培养:
当红叶石楠无根苗长到高2cm左右时,可转移到生根培养基上培养。生根培养基可用1/2MS+0.2~0.3NAA,一般经一周左右可见红色根生成,30~40天后根长1~3cm,即可进行炼苗反驯化,准备移栽。 999中国苗木网,www.999miaomu.com
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